ABSTRACT Cenostigma pyramidale [Tul.] has timber, forage and medicinal uses, and due to the exploitation of its natural resources, it may become endangered. This work aimed to induce callus in Cenostigma pyramidale and to identify the embryogenic potential by histomorphological and biochemical analysis. Leaf segments were inoculated in MS culture medium containing different concentrations (0.0; 2.5; 5.0 and 10.0 μM) of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), combined with 6-benzylaminopurine (BAP; 0.0; 2.5 and 5.0 μM) and glutamine (0.0; 0.342 and 0.684 mM). The growth curve was performed at 7-day intervals until day 77, and samples were collected for histomorphological analysis and determination of reducing sugars (RA), sucrose, and total soluble sugars (TSS) content. Callus induction is possible using leaf segments in treatment with 5.0 μM of BAP, 7.0 µM of 2.4-D and 0.684 mM of glutamine. The growth curve shows sigmoidal behavior with five distinct phases: lag, exponential, linear, deceleration and decline. It was verified the presence of cells with meristematic characteristics from the 7th day of induction, suggesting that the calli have embryogenic potential. However, differentiation of somatic embryos was not observed. There was a reduction in RA content and increase in AST and sucrose during the lag phase and beginning of the exponential phase, followed by degradation in the exponential phase until the decline phase, showing the involvement of these carbohydrates with callus growth. These results are unprecedented for the species and suggest future studies related to callus maturation aiming the differentiation of somatic embryos.

RESUMO Cenostigma pyramidale [Tul.] possui utilização madeireira, forrageira e medicinal e, em virtude da exploração de seus recursos naturais, pode acabar em via de extinção. Este trabalho objetivou induzir calos em Cenostigma pyramidale e identificar o potencial embriogênico por análises histomorfológica e bioquímica. Segmentos foliolares foram inoculados em meio de cultura MS contendo diferentes concentrações (0,0; 2,5; 5,0 e 10,0 μM) de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), combinadas com 6-benzilaminopurina (BAP; 0,0; 2,5 e 5,0 μM) e glutamina (0,0; 0,342 e 0,684 mM). A curva de crescimento foi realizada em intervalos de 7 dias, até o 77º dia, sendo coletadas amostras para análise histomorfológica e determinação do conteúdo de açúcares redutores (AR), sacarose e açúcares solúveis totais (AST). É possível a indução de calos utilizando segmentos foliolares no tratamento com 5,0 μM de BAP, 7,0 µM de 2,4-D e 0,684 mM de glutamina. A curva de crescimento apresenta comportamento sigmoidal com cinco fases distintas: lag, exponencial, linear, desaceleração e declínio. Verificou-se a presença de células com características meristemáticas a partir do 7º dia de indução, sugerindo que os calos possuem potencial embriogênico. Porém, não se observou a diferenciação de embriões somáticos. Verificaram-se redução no conteúdo de AR e aumento de AST e sacarose durante a fase lag e início da fase exponencial, seguido de degradação na fase exponencial até a fase de declínio, mostrando o envolvimento destes carboidratos com o crescimento dos calos. Esses resultados são inéditos para a espécie e sugerem estudos futuros relacionados à maturação dos calos visando a diferenciação de embriões somáticos.

Abstract Studies on metabolic processes and seed germinability of native endangered species are essential for its conservation. The objective of this work was to evaluate the effect of accelerated aging on germination and on the proteomic and polyamine (PAs) profile in seeds of Cariniana legalis. The seeds were aged at 41, 43, 45 and 47ºC for 24, 48, 72 and 96 h, under 100 % relative humidity using a completely randomized factorial design. The data were submitted to analysis of variance followed by Tukey’s test. The temperature of 47ºC was efficient in simulating seed aging, with no germination after 72 h of incubation. At 41ºC, the germination did not change significantly until 96 h. The reduction in the concentration of total free PAs, mainly spermidine, and the down-accumulation of heat shock proteins in seeds aged at 47°C were associated with induction of seed aging. Furthermore, the down-accumulation of the aconitate hydratase protein and the up-accumulation of the alcohol dehydrogenase protein were associated with loss of seed germinability and rapid deterioration in seeds aged at 47°C. The aging of C. legalis seeds is related to alteration in the contents of PAs and accumulation of some proteins involved with the loss of germinability.

Resumo Estudos sobre processos metabólicos e germinabilidade de sementes de espécies nativas ameaçadas de extinção são essenciais para sua conservação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do envelhecimento acelerado na germinação e no perfil proteômico e de poliamina (PAs) em sementes de Cariniana legalis. As sementes foram envelhecidas a 41, 43, 45 e 47°C por 24, 48, 72 e 96 h, sob 100% de umidade relativa, usando um delineamento fatorial inteiramente casualizado. Os dados foram submetidos à análise de variância seguida de teste Tukey. A temperatura de 47°C foi eficiente em simular o envelhecimento das sementes, que não germinaram após 72 h de incubação. Em 41°C, a germinação não mudou significativamente até 96h. A redução na concentração de PAs livres totais, principalmente espermidina e a diminuição no acúmulo de proteínas de choque térmico em sementes envelhecidas à 47°C foram associados à indução do envelhecimento das sementes. Além disso, a diminuição no acúmulo da proteína aconitato hidratase e o aumento no acúmulo da proteína álcool desidrogenase foram associados à perda de germinabilidade das sementes e rápida deterioração em sementes envelhecidas à 47°C. O envelhecimento de sementes de C. legalis está relacionado à alteração no conteúdo de PAs e a alteração de acúmulo de algumas proteínas envolvidas na perda da germinabilidade.

ABSTRACT The use of dark septate fungi (DSE) to promote plant growth can be beneficial to agriculture, and these organisms are important allies in the search for sustainable agriculture practices. This study investigates the contribution of dark septate fungi to the absorption of nutrients by rice plants and their ensuing growth. Four dark septate fungi isolates that were identified by Internal transcribed spacer phylogeny were inoculated in rice seeds (Cv. Piauí). The resulting root colonization was estimated and the kinetic parameters Vmax and Km were calculated from the nitrate contents of the nutrient solution. The macronutrient levels in the shoots, and the NO3--N, NH4+-N, free amino-N and soluble sugars in the roots, sheathes and leaves were measured. The rice roots were significantly colonized by all of the fungi, but in particular, isolate A103 increased the fresh and dry biomass of the shoots and the number of tillers per plant, amino-N, and soluble sugars as well as the N, P, K, Mg and S contents in comparison with the control treatment. When inoculated with isolates A103 and A101, the plants presented lower Km values, indicating affinity increases for NO3--N absorption. Therefore, the A103 Pleosporales fungus presented the highest potential for the promotion of rice plant growth, increasing the tillering and nutrients uptake, especially N (due to an enhanced affinity for N uptake) and P.

Resumo Objetivos: Efeitos do estresse salino sobre a fisiologia de Salvinia auriculata foram investigados. Metodologia As plantas foram expostas a 0, 50, 100 e 150 mmol de NaCl L-1 e incubadas durante 5 dias. O conteúdo de NO foi avaliado após 2 horas e 5 dias. Pigmentos fotossintéticos, prolina e nutrientes foram analisados após 5 dias. Resultados Principais Observou-se maior teor de clorofila a em plantas tratadas com 50 mmol L-1, diminuindo em concentrações mais altas, enquanto o conteúdo de clorofila b diminuiu com o aumento das concentrações de NaCl. A exposição a 50 mmol L-1 de NaCl aumento a biomassa, enquanto concentrações mais elevadas causaram perda de biomassa. Ca, K e Mg diminuíram com o aumento das concentrações de NaCl, e a razão Na/K foi significativamente aumentada em 150 mmol L-1 NaCl. A prolina aumentou significativamente a 150 mmol L-1. O conteúdo extracelular de NO aumentou após 2 horas, e diminuiu após 5 dias. Após 2 horas, concentrações significativamente maiores nas raízes foram observadas a 50 mmol L-1, enquanto após 5 dias diminuições foram observadas. Conclusões Os resultados indicam que a salinidade moderada induz a produção de NO durante a incubação, possivelmente associada à sinalização para a produção de compostos que auxiliem na tolerância à salinidade. Em concentrações superiores esta tolerância é reduzida. Com isso, é possível compreender melhor os mecanismos fisiológicos e bioquímicos associados a essa adaptação em macrófitas sob condições salinas, que afetam sua ecologia e distribuição em áreas costeiras

Abstract Aims: Effects of salt stress on the physiology of Salvinia auriculata were investigated. Method Plants were supplemented with 0, 50, 100 and 150 mmol L-1 NaCl and incubated for 5 days. NO content was evaluated after 2 hours and 5 days. Photosynthetic pigments, proline and nutrients were analyzed after 5 days. Major Results Higher chlorophyll a content was observed in plants treated with 50 mmol L-1, decreasing in higher NaCl concentrations, while chorophyll b content decreased with increasing NaCl concentrations. Exposure to 50 mmol L-1 NaCl increased biomass, while higher concentrations caused loss of biomass. Ca, K and Mg decreased with increasing NaCl concentrations, and the Na/K ratio was significantly increased at 150 mmol L-1 NaCl. Proline increased significantly at 150 mmol L-1. Extracellular NO content increased after 2 hours, with significantly higher NO concentrations in roots observed at 50 mmol L-1. Decreases in NO content were observed after 5 days. Conclusions The results indicate that moderate salinity induces NO production earlier during incubation, probably associated to signaling for the production of compounds that assist in stress tolerance. At higher concentrations, this tolerance is reduced. This allows for further understanding of the physiological and biochemical mechanisms associated with the adaptation of this macrophyte to saline conditions, which, in turn, affect this species ecology and distribution in coastal areas.

Among commercial fruits, papaya (Carica papaya L.) is notably one of the most common ones around the world. The aim of the current study was to establish a somatic embryogenesis protocol for the hybrid UENF/CALIMAN 01, elucidating the effects of sucrose and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) on the induction of embryogenic cultures and the effect of polyethylene glycol (PEG) on somatic embryo maturation. Immature zygotic embryos of C. papaya hybrid UENF/CALIMAN 01 were cultured in MS culture medium supplemented with different concentrations of sucrose (30 and 60 g L-1) and 2,4-D (0, 20, 40 and 80 μM). The combination of 30 g L-1 sucrose and 20 μM 2,4-D resulted in the highest induction rates and the largest callus diameters. Furthermore, this combination was associated with the greatest potential to form somatic embryos. To promote maturation, cultures were inoculated in MS medium and exposed to different concentrations of PEG (0, 30 and 60 g L-1). The 60 g L-1 PEG treatment group had the highest average for the number, maturation and conversion of somatic embryos that resulted in plantlets at the end of the process. The addition of PEG to MS medium led to increased protein synthesis. These results are unprecedented for C. papaya hybrid UENF/CALIMAN 01 as the current study demonstrates the development of somatic embryogenesis in this high quality hybrid.

O sequenciamento dos genomas de diversos organismos tornou praticável a análise global da expressão gênica, fornecendo numerosas pistas quanto à função biológica e envolvimento de inúmeros genes nos processos biológicos estudados. A proteômica é um dos ramos da biologia molecular e da biotecnologia que passou por expressivo desenvolvimento na era pós-genômica. Apesar dos recentes avanços nas técnicas em proteômica, muito resta a ser aprimorado. Devido às particularidades do reino vegetal, várias abordagens devem ser adaptadas no sentido de aumentar a eficiência e a acurácia de resultados das análises proteômicas em plantas. Nesse sentido, os dados gerados pela proteômica podem contribuir substancialmente para a compreensão e acompanhamento de eventos fisiológicos e para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas. No que tange às espécies tropicais, as dificuldades são ainda maiores, devido ao fato de serem ricas em metabólitos secundários e ainda não terem seus genomas totalmente sequenciados. Esta revisão trata de tópicos atuais em estudos de proteômica de plantas, desafios e perspectivas, com ênfase em espécies tropicais.

Genome sequencing of various organisms allow global analysis of gene expression, providing numerous clues on the biological function and involvement in the biological processes studied. Proteomics is a branch of molecular biology and biotechnology that has undergone considerable development in the post-genomic era. Despite the recent significant advancements in proteomics techniques, still there is much to be improved. Due to peculiarities to the plant kingdom, proteomics approaches require adaptations, so as to improve efficiency and accuracy of results in plants. Data generated by proteomics can substantially contribute to the understanding and monitoring of plant physiological events and development of biotechnological strategies. Especially for tropical species, challenges are even greater, in the light of the abundance of secondary metabolites, as well as of the lack of complete genome sequences. This review discusses current topics in proteomics concerning challenges and perspectives, with emphasis on the proteomics of tropical plant species.

O objetivo deste trabalho foi determinar os níveis de PAs em tecidos de medula e cultura de calos de plantas haplóides e diplóides de tabaco, obtidas da região apical e basal do caule. Estes explantes foram cultivados em meio RM-64 suplementado com AIA e cinetina, na luz e no escuro, durante vários subcultivos. Nos tecidos medulares, os níveis de PAs apresentam um decréscimo basípeto em diplóides e um aumento em haplóides.Um padrão similar nos níveis de PAs totais (livres+ conjugadas) foi observado em calos haplóides e diplóides mantidos na luz, e haplóides no escuro, enquanto os diplóides cultivados no escuro mostraram um aumento constante até o final do cultivo. O aumento no conteúdo de PAs nos calos diplóides no escuro, foi devido ao aumento do conteúdo de Put livre. Foi observado que a ploidia da planta pode expressar diferentes gradientes de PA ao longo do tecido medular e nas culturas de calos in vitro.

The aim of this work was to determine PAs levels in pith tissues and callus cultures from haploid and diploid tobacco plants, explanted from the apical and basal regions of the stem. These explants were cultured in an RM-64 medium supplied with IAA and kinetin, under light or in the dark, during successive subcultures. PAs levels followed a basipetal decrease in diploid and an increase in haploid, pith tissues. A similar pattern of total PAs (free + conjugated) was observed for the callus of diploid and haploid plants maintained in the light, and for the haploid callus in the dark, whereas the diploid callus in the dark showed a constant increase in total PAs levels until the end of culture. The PA increase in the diploid callus in the dark was related to free Put levels increase. The ploidy status of the plants could express different PA gradients together with the plant pith and in vitro callus cultures.

O objetivo deste trabalho foi a caracterização dos perfis protéicos expressos durante o desenvolvimento da semente de O. catharinensis, uma espécie recalcitrante, via eletroforese bidimensional. A extração de proteínas foi realizada utilizando tampão uréia/tiouréia seguido de uma etapa de precipitação com TCA 10%. A análise comparativa durante o desenvolvimento da semente mostrou um grande número de proteínas exclusivas em cada estádio do desenvolvimento. O estádio cotiledonar, que representa a fase de transição entre a embriogênese e o começo do metabolismo relacionado a maturação, apresentou o maior número de proteínas estádio-específicas. Proteínas relacionadas ao metabolismo oxidativo e a síntese de reservas foram identificadas via MS/MS. Estes resultados contribuem para o melhor entendimento do metabolismo de proteínas durante o desenvolvimento de sementes recalcitrantes, além de prover informações no estabelecimento de parâmetros para protocolos de embriogênese somática.

The aim of the present work was to characterize changes in the protein profile throughout seed development in O. catharinensis, a recalcitrant species, by two-dimensional gel electrophoresis. Protein extraction was undertaken by using a thiourea/urea buffer, followed by a precipitation step with 10% TCA. Comparative analysis during seed development showed that a large number of proteins were exclusively detected in each developmental stage. The cotyledonary stage, which represents the transition phase between embryogenesis and the beginning of metabolism related to maturation, presents the highest number of stage-specific spots. Protein identification, through MS/MS analysis, resulted in the identification of proteins mainly related to oxidative metabolism and storage synthesis. These findings contribute to a better understanding of protein metabolism during seed development in recalcitrant seeds, besides providing information on established markers that could be useful in defining and improving somatic embryogenesis protocols, besides monitoring the development of somatic embryos in this species.

Piper solmsianum é uma espécie herbácea do sudeste brasileiro onde vários compostos biologicamente ativos já foram identificados. O objetivo deste trabalho foi estabelecer suspensões celulares nesta espécie. Para tanto, foram utilizados explantes de pecíolos e folhas, retirados de plântulas cultivadas in vitro, os quais foram submetidos a diferentes combinações de reguladores de crescimento (AIA, ANA, 2,4-D e BAP). Foi obtida a neo-formação de raízes e brotos, estes últimos através do processo de organogênese indireta evidenciada por estudos histológicos. Para a indução e crescimento dos calos, foram avaliados, além das diferentes combinações de reguladores de crescimento, a suplementação ao meio de cultura de carvão ativado (1,5 mg.l-1) e o regime de luz. Culturas mantidas na luz, em meio de cultura suplementado com 0,2 mg.l-1 2,4-D e 2 mg.l-1 BAP e sem carvão ativado, resultaram em maior crescimento (massa fresca) dos calos. A partir destes calos, foram obtidas suspensões celulares, cuja dinâmica de crescimento e acúmulo de metabólitos foi estudado. Os resultados obtidos deverão ser utilizados para a caracterização de rotas biosintéticas em culturas in vitro em P. solmsianum.

Piper solmsianum is a shrub from Southeast Brazil in which many biologically active compounds were identified. The aim of this work was to establish a cell suspension culture system for this species. With this in mind, petiole and leaf explants obtained from in vitro plantlets were cultured in the presence of different plant growth regulator combinations (IAA, NAA, 2,4-D and BA). Root and indirect shoot adventitious formation, detected by histological analysis, was observed. Besides the different combinations of plant growth regulators, light regime and the supplement of activated charcoal (1.5 mg.l-1) were tested for callus induction and growth. Cultures maintained in light, on a 0.2 mg.l-1 2,4-D and 2 mg.l-1 BA supplemented medium, and in the absence of activated charcoal, showed the highest calli fresh matter increment. From a callus culture, cell suspension cultures were established and their growth and metabolite accumulation studied. The achieved results may be useful for further characterization of the activated secondary metabolites pathways in in vitro systems of P. solmsianum.

Foram isoladas de extratos de folhas de Ocotea catharinensis Mez (Lauraceae) quatorze neolignanas sendo nove benzofurânicas (incluindo três novas substâncias 1e, 2f e 4b), uma secobenzofurânica inédita (3b), duas biciclo[3.2.1]octânicas (incluindo a nova 5c), dois novos dímeros biciclo[3.2.1]octânicos (7a e 7b) e ainda dois sesquiterpenos (incluindo o novo humulanol 9). Nos embriões somáticos de O. catharinensis foram identificadas sete neolignanas incluindo uma nova neolignana biciclo[3.2.1]octânica (4a).

The extracts from leaves of Ocotea catharinensis Mez (Lauraceae) were found to contain fourteen neolignans and two sesquiterpenes: nine benzofuran types (including three new compounds 1e, 2f and 4b), one new seco-benzofuran type (3b), two bicyclo[3.2.1]octane types (including the new compound 5c), two new dimers of bicyclo[3.2.1]octane type (7a and 7b) and two sesquiterpenes (including a new humulanol 9). In addition, seven neolignans were also showed to occur in somatic embryos of O. catharinensis including one new bicyclo[3.2.1]octane type (4a).

Embriões zigóticos em diferentes estádios de desenvolvimento foram utilizados para avaliar o potencial de germinação e competência embriogênica in vitro. Frutos coletados entre 15 e 360 dias após a antese foram avaliados em relação ao diâmetro (mm), comprimento (mm) e massa fresca (g). Para avaliar a percentagem de germinação in vitro, embriões zigóticos em diferentes estádios de desenvolvimento foram inoculados em meio de cultura composto de sais minerais de Murashigue & Skoog (MS), ou em meio MS suplementado com 4,4 miM de BAP, sacarose (3%), ágar (0,6%), carvão ativado (0,15%). Para a indução de embriogênese somática, eixos embrionários em diferentes estádios de desenvolvimento foram inoculados em meio de cultura MS, suplementado com 2,4-D (0, 9, 18, 72 e 144 miM), sacarose (3%), ágar (0,6%), carvão ativado (0,15%). O embrião zigótico e o fruto apresentaram pequeno crescimento até 180 dias após a floração, aumentando após esta data até a última coleta (360 dias após a floração). A germinação in vitro foi observada em embriões imaturos coletados a partir dos 240 dias após a floração, com percentagem média de 40%. Na última coleta a percentagem média de germinação foi 80%. Culturas embriogênicas foram induzidas em meio de cultura contendo altas concentrações de 2,4-D (72-144 miM) em eixos embrionários coletados a partir dos 150 dias após a floração. As culturas embriogênicas foram mantidas in vitro em meio de cultura MS desprovido de reguladores de crescimento, pelo processo de embriogênese secundária repetitiva.

Zygotic embryos in different developmental stages were used to study the in vitro germination potential and embryogenic competence. Fruits harvested from 15 to 360 days after the anthesis were measured to the diameter (mm), length (mm) and fresh mass (g). For in vitro germination, zygotic embryos in different developmental stages were inoculated on Murashigue & Skoog (MS) medium or MS medium supplemented with 4.4 muM of BAP, sucrose (3%), agar (0.6%) and activated charcoal (0.15%). For the in vitro somatic embryogenesis induction, embryonic axis in different developmental stages were inoculated on MS culture medium, supplemented with 2,4-D (0, 9, 18, 72 e 144 muM), sucrose (3%), agar (0.6%) and activated charcoal (0.15%). The fruit and zygotic embryo showed some growth up to 180 days after flowering, increasing after this period until the last harvested (360 days after the flowering). The in vitro germination was observed in immature embryos collected 240 days after the flowering, with average of 40%. In the last harvesting the germination average was 80%. Embryogenic cultures were induced on MS culture medium containing high concentrations of 2,4-D (72-144 muM) in embryonic axis collected 150 days after flowering. Embryogenic cultures of O. odorifera were maintained in vitro, on MS culture medium without plant growth regulators, by repetitive secondary embryogenesis.

A utilização de porta-enxertos anões, tolerantes a problemas fitossanitários da cultura da macieira, como a podridão do colo (Phytophthora cactorum), pode aumentar o rendimento e reduzir os custos de produção. Com o presente trabalho, objetivou-se estabelecer um protocolo de micropropagação do porta-enxerto 'Seleção 69', tolerante à podridão do colo. Ápices meristemáticos foram cultivados in vitro em meio de cultura MS, suplementado com 4,4mM de 6-Benzilaminopurina (BAP), 2,5mM de Ácido indolbutírico (AIB), 0,3mM de Ácido giberélico (GA3), 3% de sacarose e 0,6% de ágar. Foram testados o efeito da concentração de BAP (2,2 e 4,4mM) e o efeito dos meios de cultura (MS, Cheng e Quoirin & Lepoivre) na multiplicação das brotações. No alongamento das brotações, foram testados os efeitos do GA3 (0; 0,5; 1,0 e 1,5mM) e AIB (0; 0,5 e 1,0mM). Para a fase de enraizamento ex vitro e aclimatização, foram testadas diferentes concentrações de AIB (0; 1 e 2g L-1). A taxa de desenvolvimento dos ápices meristemáticos cultivados in vitro foi de 30%. Para estimular a brotação, a melhor concentração de BAP foi 2,2mM, a qual proporcionou 2,6 brotações por explante. O meio MS proporcionou o maior número de brotações por explante (2,5), porém não diferiu estatisticamente do meio Cheng (2,0 brotações por explante). Para a fase de alongamento, o meio MS suplementado com 2,2mM de BAP e 1,0mM de AIB, proporcionou a maior altura das brotações (23mm). Na fase de enraizamento ex vitro e aclimatização, as concentrações de 0, 1 e 2g L-1 de AIB possibilitaram em média, 77,3% de enraizamento das microestacas.

The use of tolerant apple rootstocks to phytossanitary problems as the rotting (Phytophthora cactorum) is able to increase the production with cost reduction. The objective of the present study is to establish in vitro micropropagation protocol of the '69 Selection' rootstocks tolerant to the rotting. Meristems was cultivated in vitro on MS medium supplemented with 4.4mM of 6-Benzilaminopurine (BAP), 2.5mM of Indol Butiric Acid (IBA), 0.3mM of Giberilic Acid (GA3), 3% of sucrose and 0.6% of agar. The effect of BAP concentration (2.2 and 4.4mM) and the effect of culture media (MS, Cheng and Quoirin & Lepoivre) were tested in the shoot multiplication. In the shoot elongation phase, the effects of GA3 (0; 0.5; 1.0 and 1.5mM) and IBA (0; 0.5 and 1.0mM) were tested. During the rooting ex vitro and acclimatization phase, different IBA concentrations (0; 1 and 2g L-1) were tested. The rate of acme meristems development was 30% of the meristems cultivated in vitro. For the shoot number, the best BAP concentration was 2.2mM that provided 2.6 shoots/explant. The MS medium provided the largest shoot number for explant (2.5), however it was not differing of Cheng medium (2.0 shoots/explant). For the shoot elongation phase, the MS medium supplemented 1.0mM of IBA provided the largest height of shoots (23mm). In the ex vitro rooting and acclimatization phase, the 0, 1.0 and 2.0g L-1 of IBA concentrations, were able to achieve on average of 77,3% of microcuttings rooting.